1.设置开机参数(检测波长.流速)，更换所需流相，检查色谱柱是否正确。
2.更换管道中的流动相，冲洗进样阀，清洗进样针。
3.平衡冲洗色谱柱，同时可提前处理样品，注册样品信息。
4.平衡后进入空白试验，消除系统污染。
5.柱稳定后进样，等待操作结束(同时清洗进样针)，计算积分，出具报告。
高效液相色谱仪的详细操作步骤如下:
（一）、启动操作：
(1)打开电源，用Harb连接时，注意Harb电源，打开电脑，打开BootpServer(一般启动时已打开)；
(2).自上而下打开组件电源，BootpServer显示信号时(有六行字符)，打开工作站(先打开Online)；
(3).打开冲洗泵头10%异丙醇溶液的开关(用针刺)，控制流量大小，以流量为准；
(4).注意各流动相所剩余溶液的体积设置。如果设定的体积低于最低限度，泵将自动停止。注意洗涤泵溶液的体积，及时加液；
(5).在使用过程中，要经常观察仪器的工作状态，及时正确地处理各种突发事件。
（二）、首先，使用一定时间的流动相冲洗系统（如果使用的流动相是含盐流动相，则必须用水冲洗20分钟以上，然后更换含盐流动相）。D灯或W灯应在正式进样分析前30分钟左右打开，以延长灯的使用寿命；
建立色谱操作方法，注意保存自己命名的Method，不要覆盖或删除他人的方法和实验结果；
使用手动进样器进样时，应在进样前后用洗针液清洗进样针筒。洗针液一般选择与样品液相同的溶剂。进样前，必须用样品液清洗进样针筒3次以上，排除针筒内气泡；
溶剂瓶中的砂芯过滤器容易破碎。更换流动相时注意保护。当过滤器变脏或细菌生长时，不能用超声波清洗。5%稀硝酸溶液浸泡后可清洗；
实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管道30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗时关闭D灯.W灯；
关机时，先关闭泵.检测器等，然后关闭工作站，最后自下而上关闭色谱仪各部件，关闭洗泵溶液开关；
用户必须认真履行仪器使用登记制度，不得擅自拆卸仪器。
（三）、流动相：流动相：
①色谱纯试剂用于流动。高纯水或双蒸水、酸碱液和缓冲液应在过滤后使用。过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；
②经常更换水相流动相(一般不超过2天)，防止长菌变质；
③使用双泵时，在A.B.C.D四相中，如果使用的流动相中含有盐流动相，则将含盐流动相放置在A.D(方)放置盐流动相，B.C(入口位于混合器上方)放置无盐流动相；
A.B.C.D四种储液器之一为棕色瓶，用于储存水相流动相。
（四）、样品：
1.采用过滤或离心处理样品，确保样品中不含固体颗粒；
2.用流动相或比流动相弱的溶剂制备样品溶液（如果是反相柱，则极性大于流动相；如果是正相柱，则极性小于流动相），尽量用流动相制备样品溶液；
手动进样时，进样量尽可能小，使用定量管定量时，进样量应为定量管的3~5倍；
（五）、色谱柱：色谱柱：
1.使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围.流动相类型等；
2.使用符合要求的流动相；
3.使用保护柱；
4.如果使用的流动相是含盐流动相，使用反相色谱柱后，先用水或低浓度甲醇水(如5%甲醇水溶液)，再用甲醇冲洗。
5.不使用色谱柱时，用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；
6.不要高压冲洗柱子；
7.高温下不要长时间使用硅胶键合相色谱柱；
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