高效液相色谱仪测定保健食品中红景天苷含量

1 范围

本方法规定了以红景天为主要原料的保健食品中红景天苷的高效液相色谱仪测定方法。

本方法适用于保健品食品中红景天苷的测定，也适用于保健食品中酪醇的测定。

2 原理

试样经甲醇超声提取，以0.01 mol/L 乙酸铵-甲醇为流动相（80+20），采用高效液相色谱仪法，紫外检测器检测，根据保留时间定性，外标法定量。

3 试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T6682 规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 乙酸铵( CH3COONH4 )。

3.1.2 甲醇(CH3OH)：色谱纯。

3.1.3 甲醇(CH3OH)。

3.2 试剂配制

乙酸铵溶液 (0.01 mol/L)：称取0.77 g乙酸铵，加入适量水溶解，用水定容至1000 mL，经0.45 μm水相微孔滤膜过滤后备用。

3.3 标准品

红景天苷(C14H20O7)：纯度≥98%。

酪醇（C8H10O2)：纯度≥98%。

3.4 标准溶液的配制

3.4.1 红景天苷标准储备液(2.0 mg/mL)： 准确称取红景天苷标准品0.02 g于 10 mL 容量瓶中，用甲醇（3.1.2）溶解并定容至刻度 ，摇匀。

3.4.2 红景天苷标准工作液：将红景天苷标准储备液（3.4.1）用甲醇（3.1.2）稀释制备一系列标准溶液，标准系列浓度为0mg/mL、0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.05mg/mL、0.20 mg/mL、0.50 mg/mL，临用时配制。

3.4.3 酪醇标准储备液(2.0 mg/mL)：准确称取酪醇标准品0.02 g于 10 mL 容量瓶中，用甲醇（3.1.2）溶解并定容至刻度 ，摇匀。

3.4.4 系统适用性溶液：准确吸取红景天苷标准储备液（3.4.1）和酪醇标准储备液（3.4.3）各0.5mL于 10 mL 容量瓶中，用甲醇（3.1.2）稀释至刻度 ，摇匀。

4 仪器设备

4.1 高效液相色谱仪： 配有紫外检测器（UV）。

4.2 超声波清洗器。

4.3 分析天平：感量为0.01 mg，0.1 mg。

5 分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 固体样品：取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎、混匀，准确称取适量试样（约含红景天苷2.5mg）于 25 mL 容量瓶中，加入甲醇（3.1.3）约20mL，超声提取30 min，放冷至室温，用甲醇（3.1.3）定容至刻度。混匀后经0.45 μm滤膜过滤，供高效液相色谱仪分析用。

5.1.2 液体样品：准确吸取适量摇匀后的试样（约含红景天苷2.5mg）于25 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.3）定容至刻度。混匀后经0.45 μm滤膜过滤，供液相色谱分析用。

5.2 色谱参考条件

5.2.1 色谱柱：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，填料粒径5 μm，或同等性能色谱柱；

5.2.2 流动相：乙酸铵溶液（0.01 mol/L）-甲醇（80+20）；

5.2.3 流速：1.0 mL/min；

5.2.4 柱温：25 ℃；

5.2.5 检测波长：215 nm；

5.2.6 进样量：10 mL。

5.2.7 系统适用性试验：取系统适用性溶液（3.4.4）10 mL，注入液相色谱仪，记录色谱图，红景天苷峰与酪醇峰的分离度应大于1.5。

5.3 标准曲线的制作

将标准系列工作液（3.4.2）分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的色谱峰高或峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积或峰高为纵坐标，绘制标准曲线。

5.4 试样溶液的测定

将试样待测液(5.1.1或5.1.2)注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，测得峰面积或峰高，根据标准曲线得到待测液红景天苷的浓度。

6 分析结果的表述

试样中红景天苷含量按式(1)计算:

C ×V

X = × 100 .......................................(1)

m

式中：

X －试样中红景天苷的含量，单位为毫克每百克或毫克每百毫升（mg/100g或mg/100mL）；

C—由标准曲线查得待测样液中红景天苷的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

V—样品的定容体积，单位为毫升（mL）；

m—样品量，单位为克或毫升（g或mL）；

100—单位转换。

计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留三位有效数字。

7 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 10% 。

8 其他

当称样量为 1 g，定容体积为 25 mL时，红景天苷的检出限为50m g/g。