高效液相色谱仪测定保健食品中茶氨酸含量

1 范围

本方法规定了保健食品中茶氨酸的高效液相色谱仪测定方法。

本方法适用于红茶、绿茶等为主要原料的保健食品中茶氨酸含量的测定。

2 方法原理

. 将试样中的茶氨酸用水提取，使用等度洗脱，高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，峰面积或峰高定量，外标法计算结果。

3 试剂

注：除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682规定一级水要求。

3.1 三氟乙酸(CF3COOH)：色谱纯。

3.2 茶氨酸标准品(C7H14N2O3)：CAS号3081-61-6，纯度≥98％。

3.3 三氟乙酸水溶液（pH 3.0）：取水加三氟乙酸（3.1），调至pH 3.0。

3.4 茶氨酸标准储备液（3.5 mg/mL）：称取35.0 mg茶氨酸标准品（精确到0.1 mg），用水溶解后，移入10 mL容量瓶，用水定容至刻度。

3.5 茶氨酸标准使用液：分别准确吸取茶氨酸标准储备液（3.4）0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL，移入10 mL容量瓶，用水定容至刻度。得到浓度分别为0.07 mg/mL、0.14 mg/mL、0.21 mg/mL、0.28 mg/mL、0.35 mg/mL茶氨酸标准使用液。

4 仪器设备

4.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

4.2 恒温水浴锅。

4.3 离心机，4000 r/min。

4.4 分析天平：感量1 mg，0.1 mg。

4.5 pH计。

5 分析步骤

5.1 固体试样的处理：称取粉碎试样适量（精确至0.001 g，相当于含茶氨酸10 mg），加水30 mL，在80 ℃的恒温水浴锅上加热40 min，冷却，离心，过滤后，转移至50 mL容量瓶，用水定容至刻度，混匀。试样溶液过0.45 μm水膜，待测。

5.2 液体试样的处理：取一定量的试样在水浴锅上蒸干，残渣用水溶解，转移至10 mL容量瓶，用水定容至刻度，混匀。溶液过0.45 μm水膜，待测。

5.3 色谱参考条件

5.3.1 色谱柱：C18柱,5 μm,4.6×250 mm或同效柱。

5.3.2 检测波长：203 nm。

5.3.3 流动相：三氟乙酸水溶液（3.3）。

5.3.4 流速：1.0 mL/min。

5.3.5 进样量：10.0 mL。

5.3.6 柱温：35 ℃。

5.4 色谱分析

5.4.1 标准曲线的制备：分别取标准使用液（3.5）浓度分别为0.07 mg/mL、0.14 mg/mL、0.21 mg/mL、0.28 mg/mL、0.35 mg/mL各10 μL进行HPLC分析，以标样浓度对峰面积绘制茶氨酸的标准回归曲线。

5.4.2 试样测定：将试样溶液注入高效液相色谱仪，以保留时间和紫外-可见吸收光谱定性，以峰面积定量，由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的茶氨酸的浓度。

6结果计算

6.1试样中茶氨酸的含量

式中：

X—试样溶液中茶氨酸的含量，g/100g；

C—试样溶液中茶氨酸的浓度，mg/mL；

V—试样定容体积，mL；

m—试样质量，g。

6.2结果表示：计算结果保留三位有效数字。

计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。

7 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 10% 。

8 其他

本方法的最低检出量：10 ng。