1范围
本方法规定了保健食品中肉碱的高效液相色谱仪测定方法。
本方法适用于以肉碱为主要原料的保健食品中肉碱的测定。
2原理
试样中的肉碱以0.5mmol/L的盐酸溶液经超声提取，反相高效液相色谱仪分离，以标准品的保留时间定性，外标法定量。
3试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 磷酸氢二钾(K2HPO4)。
3.1.2 辛烷磺酸钠(C8H19NaO3S)。
3.1.3 盐酸(HCl)。
3.1.4 磷酸(H3PO4)。
3.1.5硅藻土(SiO2)：化学纯。
3.1.6乙腈(C2H3N)：色谱纯。
3.2 试剂配制
3.2.1 盐酸溶液(0.50 mmol/L)：吸取4.2mL盐酸，用水稀释并定容至100mL。再吸取上述溶液1mL，用水稀释并定容至1L。
3.2.2 缓冲盐溶液：分别称取8.7g磷酸氢二钾和0.4325g辛烷磺酸钠，用水溶解并稀释至1L，用磷酸调至pH2.5。
3.3 标准品
肉碱(C7H15NO3)：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 肉碱标准储备液(1.0mg/mL)：精密称取肉碱标准品25 mg（精确到0.1mg）于25 mL容量瓶中，用盐酸溶液溶解并定容至刻度，摇匀。
3.4.2 肉碱标准工作液：分别准确吸取肉碱标准储备液0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL于5 mL容量瓶中，用盐酸溶液稀释至刻度，得浓度为0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL、0.60 mg/mL、0.80 mg/mL、1.0 mg/mL的标准工作液。
4仪器
4.1 高效液相色谱仪：配有紫外（UV）检测器或二极管阵列（DAD）检测器。
4.2 天平：感量 0.1mg和0.01mg
4.3 超声波提取器。
5分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 试样处理
5.1.1.1 固体试样
称取粉碎并混合均匀的试样0.1 g~2 g (精确到0.001g)(含待测组分约5 mg~50 mg)，于50mL容量瓶中，加入盐酸溶液约35mL，超声提取10min，放冷，用盐酸溶液稀释至刻度，混匀，过滤，弃初滤液数毫升，收集滤液，过0.45μm水相滤膜，取续滤液待测。
5.1.1.2 软胶囊试样
取试样剪开，挤出内容物并混匀，称取0.1 g~2 g(精确到0.001g)，加入等量硅藻土，研至分散均匀，称取其中部分(精确到0.001g，含待测组分约5 mg~50 mg)，转移至250 mL具塞三角瓶中，并吸取盐酸溶液50mL，并入三角瓶中，称重，加塞超声提取10 min，放冷，用盐酸溶液补足重量，混匀，过滤，弃初滤液数毫升，收集滤液，过0.45 μm水相滤膜，取续滤液待测。
5.1.1.3 液体试样
精密量取混匀后的试样1.0 mL~5.0 mL (含待测组分约5 mg~50 mg)，于50 mL容量瓶中，加入盐酸溶液约35 mL，超声提取10 min，放冷，用盐酸溶液稀释至刻度，混匀，过滤，弃初滤液数毫升，收集滤液，过0.45 μm水相滤膜，取续滤液待测。
5.1.2 稀释
根据试样中肉碱含量用盐酸溶液进行适当的稀释（F），使待测溶液中肉碱的浓度在0.10 mg/mL~ 1.0 mg/mL。
5.2 色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：C18柱：4.6×250mm，5μm或同等性能的色谱柱。
5.2.2 流动相：缓冲盐溶液+乙睛=90+10。
5.2.3 流速：0.8mL/min。
5.2.4 检测波长：210nm。
5.2.5 进样量：20μL。
5.3 标准曲线的制作
将肉碱标准工作液(3.4.2)从低浓度到高浓度分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积。以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线(标准溶液液相色谱图见附录A中图 A.1 )。
5.4待测溶液的测定
在相同色谱条件下，将待测溶液(5.1.1.1、5.1.1.2、5.1.1.3、5.2.1)注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，测得峰面积，根据标准曲线计算待测溶液中肉碱的浓度(待测溶液液相色谱图见附录A中图A.2)。
6 分析结果的表述
试样中肉碱含量按式(1)计算：
...................................(1)
式中：
X——试样中肉碱的含量，固态试样单位为克每百克(g/100g)，液态试样单位为克每百毫升(g/100mL)；
ρ——根据标准曲线计算待测溶液中肉碱的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；
V——试样稀释体积，单位为毫升(mL)；
m——试样取样质量，单位为克(g)；试样取样体积，单位为毫升(mL)；
F——稀释倍数；
100——单位转换；
1000——单位转换。
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