高效液相色谱仪测定保健食品中芦荟苷含量

1 范围

本标准规定了保健食品中芦荟苷的高效液相色谱仪测定方法。

本标准适用于以芦荟及其加工品为原料的保健食品中芦荟苷含量的测定。

2 原理

样品用甲醇+水（55+45）作为溶剂，提取试样中的芦荟苷，经高效液相色谱仪C18 柱分离，在293 nm波长处检测，以芦荟苷保留时间定性，峰面积定量。

3 试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T6682 规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 甲醇(CH3OH)：色谱纯。

3.1.2 石油醚：沸程30℃～60℃。

3.2 标准品

芦荟苷标准品(C21H22O9)。

3.3 标准溶液的配制

3.3.1 芦荟苷标准储备溶液：称取10.00 mg芦荟苷标准品于25 mL 容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀。

3.3.2 芦荟苷标准工作液：分别吸取芦荟苷标准储备溶液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL至10 mL容量瓶中，用流动相定容，得浓度为20 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL、160 μg/mL、240 μg/mL的标准工作液。

4 仪器设备

4.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。

4.2 超声波清洗器。

4.3 分析天平：感量1 mg，0.1 mg。

4.4 离心机：转速≥3000 r/min。

4.5 微孔滤膜：0.45 μm。

5 分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 固体试样

称取已粉碎混合均匀的待测试样1 g(精确到 0.001 g)，置具塞锥形瓶中，加入50.0 mL流动相，称重，超声处理10 min，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液待测。必要时可进行适当稀释。

5.1.2含油基质试样

称取混合均匀的待测试样1 g(精确到 0.001 g)，置具塞锥形瓶中，加入25.0 mL石油醚，涡旋使充分混匀，过滤，弃去石油醚液，再用少量石油醚洗涤锥形瓶及滤纸，挥干，将滤纸和残渣置于原具塞锥形瓶中，加入50.0 mL流动相，称重，超声处理10 min，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液待测。必要时可进行适当稀释。

5.1.3 水性液体试样

吸取待测试样，必要时以流动相适当稀释，离心，取上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤。

5.2色谱参考条件

5.2.1 色谱柱：C18柱，柱长250 mm，内径4.6 mm，粒径5 μm，或同等性能的色谱柱。

5.2.2流动相：甲醇+水=55+45。

5.2.3流速：1 mL/min。

5.2.4柱温：40℃。

5.2.5检测波长：293 nm。

5.2.6进样量：10 μL。

5.3 标准曲线的制作

将标准系列各浓度溶液(3.3.2)，注入高效液相色谱仪中，测得相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线(标准溶液液相色谱图见附录A中图A.1 )。

5.4 试样溶液的测定

将试样溶液(5.1.1、5.1.2、5.1.3)注入液相色谱仪中，以保留时间定性，同时记录峰面积，根据标准曲线得到待测液中芦荟苷的浓度(样品溶液高效液相色谱仪谱图见附录A中图A.2)。

6 结果计算

试样中芦荟苷含量按式(1)计算：

Ci×V ×100

Xi = ..........................................(1)

m×1000

式中：

Xi 试样中芦荟苷的含量，单位为克每百克（g/100 g）或克每百毫升（g/100 mL）；

Ci——由标准曲线查得测定样液中芦荟苷的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

V 被测定样液的最终定容体积，单位为毫升（mL）；

m 试样的称样质量，单位为克（g）或毫升（mL）；

100——单位转换；

1000——单位转换。

计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留三位有效数字。

7 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 10% 。

8 其他

当称样量为1 g，定容体积为50 mL时，芦荟苷的定量限为0.0046g/100g。

附录 A

标准溶液和试样溶液典型液相色谱图